Medindo a carga bacteriana de E. coli em Drosophila melanogaster após infecção por E. coli

Comece com moscas adultas de Drosophila melanogaster injetadas com E. coli. Nos momentos desejados após a injeção, transfira as moscas anestesiadas para tubos de microcentrífuga separados no gelo, reduzindo sua atividade metabólica.

Adicione tampão e homogeneize as moscas, quebrando o tecido, liberando E. coli e microbiota intestinal endógena.

Transfira cada homogenato de mosca contendo E. coli para poços de placas de vários poços. Encha os poços restantes com tampão. Efectuar uma diluição em série do homogenato contendo E. coli.

Depositar a suspensão homogeneizada diluída de cada poço e pontos discretos numa placa de ágar nutriente, a partir da diluição mais baixa. Deixe as manchas serem absorvidas pelo ágar. Incube a placa durante a noite para permitir a multiplicação de E. coli, formando colônias visíveis. A duração da incubação é fundamental para evitar a formação das colônias endógenas da microbiota intestinal da mosca.

Conte as colônias de E. coli para cada mosca das diluições com colônias contáveis não sobrepostas. Calcule a unidade formadora de colônias - a carga bacteriana viável - no homogeneizado inicial em diferentes momentos pós-injeção.

A diminuição da carga de E. col