Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:44 min. • July 8th, 2025
Para detectar a ativação do inflamassoma do receptor P3 do tipo NOD, ou NLRP3, pegue uma placa de vários poços contendo macrófagos ativados que expressam proteínas NLRP3.
Trate as células com meios contendo ionóforos e glicina. Os ionóforos induzem o efluxo de íons potássio, ativando e oligomerizando as proteínas NLRP3. O NLRP3 oligomerizado recruta proteínas adaptadoras, facilitando a ligação da pró-caspase-1, formando o complexo inflamassoma NLRP3.
No inflamassoma, a proximidade desencadeia a autoclivagem pró-caspase-1, liberando caspases ativas, iniciando piroptose e condensação nuclear. Além disso, a glicina estabiliza a estrutura celular, impedindo a lise celular.
Trate macrófagos com sondas repórteres fluorescentes contendo um grupo de ligação caspase-1 e um fluoróforo ligado por meio de uma sequência de aminoácidos. A caspase-1 ativada reconhece a sequência de aminoácidos da sonda e se liga ao seu grupo de ligação à caspase, permitindo sua visualização.
Fixe as células e cubra-as com corante fluorescente para manchar os núcleos. Imagem sob um microscópio de fluorescência.
Conte macrófagos com núcleos condensados azuis e focos fluorescentes verdes de caspase-1 ativada, sugeri
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