Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:02 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de ensaio contendo macrófagos preparados com lipopolissacarídeo.
O priming aumenta a expressão de precursores de citocinas pró-inflamatórias inativas e proteínas NLRP3.
Adicione a nigericina, um ionóforo de potássio, promovendo o efluxo de íons. Isso interrompe os níveis intracelulares de potássio, desencadeando proteínas NLRP3, para formar um grande complexo.
O NLRP3 oligomerizado recruta as proteínas adaptadoras, ASC, causando sua polimerização. Os filamentos ASC recrutam pró-caspase-1, formando NLRP3-inflamassoma, um complexo multiproteico.
A pró-caspase-1 sofre autoativação induzida por proximidade, gerando caspase-1. A caspase-1 cliva a citocina pró-inflamatória e a proteína gasderminina-D, criando um poro da membrana plasmática.
Isso resulta em secreção de citocinas e morte celular programada inflamatória, piroptose, liberando conteúdo intracelular, incluindo lactato desidrogenase ou LDH. Colete o sobrenadante contendo LDH.
Adicione a mistura de substrato - lactato, iodonitrotetrazolium violeta ou corante INT, NAD + e diaforase. O LDH oxida o lactato em piruvato enquanto reduz o NAD+. Diaforase catalisa a redução de INT, formando formazan de cor vermelha.
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