Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:57 min. • July 8th, 2025
Pegue um tubo de vidro contendo homogenato de neutrófilos com componentes intracelulares liberados.
Adicione metanol, um solvente polar, que interrompe as interações lipídio-lipídio e lipídio-proteína. A polaridade inerente do metanol distribui uniformemente os lipídios polares, solubilizando-os. Em seguida, adicione clorofórmio, um solvente orgânico apolar, que interage com lipídios apolares, fazendo com que eles se dispersem e solubilizem.
Centrifugue para separar o pellet contendo proteínas do sobrenadante contendo lipídios, polissacarídeos e detritos celulares. Transfira o sobrenadante para um tubo de vidro novo. Adicione clorofórmio e água destilada. Centrifugue a amostra.
A adição de água forma espontaneamente um sistema bifásico, particionando biomoléculas nas camadas inferior de clorofórmio e superior de água-metanol
.A camada de clorofórmio compreende lipídios apolares dissolvidos, enquanto a camada superior contém contaminantes não lipídicos e mais lipídios polares. Remova a camada superior de água-metanol sem perturbar a camada que contém lipídios.
Use um concentrador a vácuo para remover o solvente dos lipídios. Armazene em temperaturas mais baixas até uso posterior.
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