JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:49 min • July 8th, 2025
Pegue um camundongo anestesiado com orelhas depiladas e aplique o antígeno de teste - um hapteno misturado em uma solução veicular adequada - na pele exposta. A solução do veículo facilita a penetração do hapteno através da camada mais externa da epiderme para alcançar a derme subjacente.
O hapteno se liga às proteínas da pele, formando um imunógeno reconhecido pelas células apresentadoras de antígenos ou APCs. Após o engolfamento, as APCs processam e exibem o imunógeno em sua superfície.
As APCs migram para os linfonodos, apresentando o imunógeno às células T virgens e ativando-as. As células ativadas se diferenciam em células T de memória preparadas - um subconjunto das quais migra para a pele.
Após a reexposição ao hapteno, as APCs apresentam o imunógeno às células T preparadas, induzindo a liberação de citocinas pró-inflamatórias.
As citocinas fazem com que os queratinócitos e mastócitos liberem quimiocinas, que se ligam aos neutrófilos circulantes, facilitando seu extravasamento. Os neutrófilos extravasados atingem o local da inflamação.
As citocinas ativam os neutrófilos para produzir enzimas proteolíticas e espécies reativas de oxigênio - causando danos aos tecidos e amplificando a inflamação.
Para começar, anestesie o camundongo com uma injeção intraperitoneal de um coquetel anestésico e confirme a sedação adequada com um teste de pinça do dedo do pé. Em seguida, aplique o creme depilatório na superfície dorsal de ambas as orelhas. Limpe-o em um minuto e lave a pele com água.
Meça a espessura da orelha onde as aplicações foram feitas usando um micrômetro. Mais tarde, devolva o camundongo em sua própria gaiola depois de recuperado da anestesia e deixe o camundongo descansar por pelo menos três dias antes de fazer novos testes.
Após três dias, re-anestesiar o mouse e medir a espessura da orelha novamente para se certificar de que não está irritado. Em seguida, aplique 12,5 microlitros de oxazolona a 1,25% em cada lado da orelha direita e aplique 12,5 microlitros da solução veículo de acetona-azeite em cada lado da orelha esquerda.
Como sempre, observe o camundongo se recuperar da anestesia. 24 horas depois, meça a espessura da orelha novamente sob anestesia, para garantir que a inflamação da pele induzida por oxazolona ocorreu.