Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:25 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo macrófagos.
Adicione Cryptococcus neoformans aos poços de teste, enquanto os poços de controle contêm apenas macrófagos.
Macrófagos fagocitam fungos dentro de fagossomos.
Lave com tampão para remover fungos não fagocitados. Adicione mídia sem antibióticos. Incubar.
O fagossomo se funde com o lisossomo, formando um fagolisossomo. Os fungos modulam o pH do fagolisossomo e possuem mecanismos intrínsecos para sobreviver a condições fagolisossômicas adversas. Os fungos permeabilizam a membrana fagolisossomal e se replicam, acompanhados por acúmulo citosólico de vesículas cheias de polissacarídeos.
A residência e replicação fúngica intracelular causam danos celulares, desencadeando vias de morte celular. Isso causa lise de macrófagos e liberação de conteúdo intracelular, incluindo lactato desidrogenase ou LDH, em meios.
Colete mídia contendo LDH em diferentes momentos. Lise os macrófagos de controle em pontos de tempo semelhantes para liberação máxima de LDH celular. Adicione a mistura de ensaio aos meios e lisatos coletados. O LDH converte lactato em piruvato, reduzindo o NAD+. Diaforase reduz o sal de tetrazólio, formando um produto de formazan
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