Um sistema de infecção baseado em inserção de membrana permeável para estudar o impacto de toxinas bacterianas

Pegue um sistema de infecção de duas câmaras separado por uma inserção de membrana permeável. O compartimento inferior contém queratinócitos humanos aderentes ou células da pele.

Adicione patógenos bacterianos na câmara superior e incuba. A membrana impede o contato direto dos patógenos com os queratinócitos. Os patógenos secretam estreptolisina S ou SLS - uma pequena toxina - que atravessa a membrana para atingir as células.

O cotransportador de bicarbonato de sódio nos queratinócitos medeia o influxo de íons bicarbonato e sódio, mantendo o pH intracelular. O SLS se liga ao cotransportador e interrompe o transporte de íons, levando ao estresse osmótico intracelular.

A sinalização a jusante induzida por estresse causa degradação do inibidor ligado ao Fator Nuclear Kappa B sequestrado, ou NF-κB, levando à sua ativação. O NF-κB ativado se transloca para o núcleo, levando à regulação positiva da produção de citocinas pró-inflamatórias.

Após a secreção extracelular, as citocinas se ligam aos receptores de morte na célula hospedeira, iniciando a necrose. Após a incubação, colher o sobrenadante da cultura para avaliar o impacto da toxina bacteriana.

Imediatamente antes do tratamento, use