Extraindo lisado de células hospedeiras de células hospedeiras infectadas cultivadas em um sistema de membrana permeável

Comece semeando células hospedeiras de mamíferos no compartimento inferior de um sistema de membrana permeável.

Adicione Streptococcus - uma bactéria patogênica conhecida por secretar estreptolisina S ou toxina SLS, à inserção da membrana. A toxina SLS se difunde através do poro da membrana e atinge a célula hospedeira.

Os cotransportadores de sódio-bicarbonato ligados à membrana regulam o transporte de íons, mantendo a homeostase celular. A toxina se liga a esses cotransportadores, interrompendo o transporte de íons e causando estresse osmótico nas células hospedeiras.

Isso ativa várias cascatas de sinalização a jusante, incluindo p38 MAPK, uma via de proteína quinase ativada por mitógeno. A p38 MAPK ativada fosforila seus alvos a jusante, iniciando uma resposta celular contra a bactéria.

Em seguida, remova a inserção da membrana permeável. Aspire o meio acima das células hospedeiras. Adicione tampão de lise para liberar o conteúdo celular. Centrifugue para pellet os restos da célula.

Recolher o sobrenadante que contém os componentes do lisado solúvel e o sedimento que contém os componentes do lisado insolúvel. Armazene as amostras para análise posterior.

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