Análise de sinapses imunes entre células T humanas e células Raji carregadas com SEB usando citometria de fluxo de imagem

Pegue tubos de citometria de fluxo contendo células Raji descarregadas e Staphylococcus aureus enterotoxina B ou células Raji carregadas com SEB.

Essas células Raji carregadas de SEB funcionam como células B apresentadoras de antígenos substitutos contendo o superantígeno SEB complexado a moléculas de MHC de classe II.

Incubar com pan-leucócitos.

Os receptores de células T, TCRs nas células T, ligam-se aos SEBs nas células Raji, que, juntamente com os sinais co-estimulatórios, estabelecem uma junção célula-célula estável, uma sinapse imune, levando à ativação das células T.

Isso desencadeia vias de sinalização intracelular, causando o rearranjo do citoesqueleto de actina, com o agrupamento de moléculas de sinalização e receptores de superfície dentro da sinapse.

Após a incubação, fixe as células para preservar suas estruturas celulares. Permeabilize as células para acessar alvos intracelulares.

Adicione anticorpos anti-CD3 marcados com fluoróforo, faloidina e DAPI, que se ligam ao CD3 no complexo TCR, filamentos de actina e DNA, respectivamente.

Usando um citômetro de fluxo de imagem, visualize sinais fluorescentes de CD3 e actina para determinar seu enriquecimento na sinapse na pr