Um ensaio para estudar a regulação da fagocitose de macrófagos por células-tronco mesenquimais

Pegue uma placa multipoços com células-tronco mesenquimais, ou MSCs, em poços selecionados.

Introduzir macrófagos e incubar, facilitando a interação MSC-macrófagos nos poços de co-cultura.

Adicione zimosan - um componente da parede celular da levedura - conjugado a um fluoróforo sensível ao pH em todos os poços.

Os receptores eliminadores de macrófagos se ligam à zimosana, desencadeando seu engolfamento dentro de um fagossomo, que se funde com um lisossomo para formar um fagolisossomo.

Um pH ácido dentro do fagolisossomo faz com que o fluoróforo emita fluorescência.

Nos poços de co-cultura, as MSCs projetam nanotubos de tunelamento, ou TNT, extensões citoplasmáticas que fazem a ponte com os macrófagos. As mitocôndrias MSC viajam através do TNT para entrar nos macrófagos, aumentando o número total de mitocôndrias funcionais.

Um número mitocondrial elevado aumenta a produção de trifosfato de adenosina ou ATP, que alimenta a necessidade de energia para um aumento na fagocitose.

Registre a intensidade de fluorescência ao longo do tempo dos zimosanos conjugados com fluoróforo internalizado.

A co-cultura mostra maior fluorescência em comparação com poços com apenas macrófagos, indicando