Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:55 min. • July 8th, 2025
Para investigar o impacto da vitronectina - uma glicoproteína sérica humana, nas bactérias, comece com tubos contendo suspensão de Haemophilus influenzae.
Trate um tubo com soro humano normal contendo vitronectina e o outro com soro empobrecido de vitronectina. Ambas as variantes de soro contêm anticorpos e várias proteínas do complemento - essenciais para a atividade bactericida.
Durante a incubação, os anticorpos interagem com as proteínas da superfície bacteriana, ativando as proteínas do complemento para formar C5 convertase, que cliva C5. C5b associa-se a C6, seguido por C7, formando o complexo C5b6-7. Este complexo se liga à membrana celular bacteriana e recruta C8, formando C5b67-8.
Esse processo facilita a fixação de monômeros C9 e sua polimerização, gerando o complexo de ataque à membrana - uma estrutura formadora de poros. Esses poros causam o influxo de íons e água, levando à lise bacteriana.
Em contraste, no tubo com soro normal, a vitronectina se liga a uma proteína de superfície bacteriana que interage com o complexo C5b6-7 e os monômeros C9. Essas interações impedem o recrutamento de C8 e a polimerização de C9, inibindo a formação de complexos de ataque à membrana e levando à sobrevivência bacteriana.
Retire a suspensão bacteriana de ambos os tubos e cultura em placas de ágar individuais.
As colônias bacterianas mais altas no soro contendo vitronectina confirmam seu papel na resistência bacteriana contra a atividade bactericida do soro humano.
Para realizar a análise da resistência dependente de vitronectina à atividade bactericida do soro humano, primeiramente, cultive e pulverize as bactérias conforme descrito no protocolo de texto. Após a centrifugação, ressuspenda o pellet bacteriano com 1 volume de tampão veronal de gelatina dextrose. Agora adicione 1.500 UFC de bactérias a 100 microlitros de DGVB++ contendo 5% de soro.
Incubar a amostra a 37 graus Celsius por 15 minutos com agitação a 300 RPM. Retirar uma alíquota de 10 microlitros da mistura de reacção aos 0 minutos e 15 minutos. Coloque a alíquota no ágar chocolate e incube o prato a 37 graus Celsius durante a noite. Após a incubação das placas de ágar chocolate, conte as colônias que aparecem na placa e calcule a porcentagem de bactérias mortas conforme descrito no protocolo de texto.