Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:06 min. • July 8th, 2025
Comece com uma cultura descongelada de Mycobacterium bovis BCG lux, uma cepa bioluminescente geneticamente modificada de Mycobacterium bovis atenuado que expressa a enzima repórter luciferase.
Inocular a suspensão num balão de cultura contendo o meio de crescimento suplementado com antibiótico higromicina. Incubar. O BCG lux abriga o gene resistente à higromicina, facilitando sua sobrevivência e crescimento.
Pós-incubação, preparar diluições de cultura adequadas utilizando um tampão em tubos de luminómetro. Transfira para o luminômetro, carregado com uma solução de substrato de aldeído alifático de cadeia longa. Durante a corrida, o aldeído é injetado na suspensão micobacteriana que entra nas células.
A luciferase bacteriana catalisa a oxidação do mononucleotídeo de flavina reduzida endógena e do aldeído, resultando na emissão de luz azul-esverdeada. A intensidade de bioluminescência medida indica a atividade metabólica do BCG lux e se correlaciona com a medida de bactérias viáveis ou unidades formadoras de colônias, UFC.
Em seguida, centrifugue a cultura micobacteriana restante. Ressuspenda o pellet micobacteriano em um tampão contendo um surfactante não iônico para evitar a aglom
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