Uma técnica para gerar um modelo de camundongo com artrite induzida por adjuvante

Para gerar um modelo de camundongo com artrite induzida por adjuvante, comece com um camundongo anestesiado em decúbito ventral.

Pegue uma seringa contendo adjuvante completo de Freund ou CFA, uma suspensão de Mycobacterium tuberculosis morto pelo calor em óleo. Injete o CFA no espaço articular do tornozelo - uma região cheia de líquido sinovial entre o osso da perna e o osso do pé - seguido de injeção no tecido ao redor da articulação, induzindo inflamação crônica.

A cavidade cheia de líquido é delimitada por uma membrana sinovial, consistindo em uma camada de revestimento enriquecida com macrófagos e fibroblastos - funcionando como uma barreira imunológica - e um tecido intersticial de sub-revestimento.

Os macrófagos reconhecem o antígeno bacteriano e se transformam em um fenótipo fagocítico, interrompendo a integridade da barreira. Os macrófagos também liberam quimioatraentes e citocinas. Os quimioatraentes liberados medeiam o recrutamento de neutrófilos circulatórios para o local da infecção.

O reconhecimento do antígeno bacteriano ativa os neutrófilos, resultando em degranulação. As metaloproteinases e proteases da matriz liberadas causam danos à cartilagem e inflamação sustentada.

As citocinas secretadas por macrófagos também se ligam a receptores nos fibroblastos sinoviais. A ligação de citocinas e o reconhecimento de antígenos induzem a ativação de fibroblastos.

Os fibroblastos ativados sofrem proliferação anormal, resultando em hiperplasia sinovial - levando ao excesso de produção de líquido sinovial e inchaço articular, característico da artrite.

Suspenda o adjuvante de Freund completo por vórtice por pelo menos cinco segundos. Em seguida, coloque 100 microlitros de suspensão em um injetor de insulina.

Após a anestesia, marque a pata escolhida e injete 20 microlitros de adjuvante de Freund completo do injetor em quatro pontos periarticulares no espaço articular do tornozelo. Coloque os ratos processados em uma nova câmara. Monitore os ratos para garantir que eles estejam respirando até que recuperem a capacidade de se mover. A cada três dias, use um medidor de espessura de bolso para medir o diâmetro da articulação do tornozelo.

Além disso, avalie a gravidade da artrite pelo critério de pontuação da artrite. Zero é normal. Nenhuma evidência de eritema e inchaço.

Uma é a artrite mais leve. Eritema e inchaço leve confinado aos tarsos ou à articulação do tornozelo. Dois é a artrite moderada. Eritema e inchaço leve que se estende do tornozelo aos tarsos. Três é a artrite grave. Eritema e edema moderado que se estende do tornozelo às articulações metatarsais. Quatro é a artrite mais grave. Eritema e edema grave abrangem o tornozelo, pé e dedos, ou anquilose do membro.