Por que o procedimento de cateterização é importante para a consistência do modelo de infecção?

A cateterização padronizada garante a entrega reprodutível de bactérias à luz da bexiga, minimizando a variabilidade no estabelecimento da infecção entre os animais.

Como a toxina alfa-hemolisina permite a fuga bacteriana de vesículas?

Monômeros da toxina alfa-hemolisina se montam em complexos porosos na membrana vesicular, permitindo que as bactérias se transloquem para o citoplasma da célula hospedeira para replicação.

O que quantifica a formação de comunidades bacterianas intracelulares neste modelo?

A formação de CBI é avaliada por microscopia ou enumeração bacteriana a partir de homogeneizados da bexiga, refletindo a replicação intracelular e a agregação semelhante a biofilme.

Por que o progresso da infecção é monitorado ao longo do tempo em camundongos machos?

O rastreamento da disseminação bacteriana de IBCs para células vizinhas ajuda a avaliar o impacto terapêutico na propagação e persistência da infecção.

Quais limiares estatísticos definem o estabelecimento bem-sucedido da infecção?

O sucesso da infecção é determinado por escores de qualidade da instilação pré-definidos e por medições da carga bacteriana pós-inoculação acima dos níveis de fundo.

Cateterismo transuretral e inoculação bacteriana para gerar um modelo de infecção do trato urinário em camundongos machos

JoVE Encyclopedia of Experiments

Imunologia

0 vistas • 2:32 min • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pegue um camundongo macho anestesiado e insira um cateter em sua genitália.

Introduza bactérias uropatogênicas na uretra. Dentro do trato urinário, a bactéria se liga à célula uroepitelial.

A interação das proteínas de superfície bacteriana com as proteínas da membrana da célula hospedeira induz o rearranjo do citoesqueleto, fazendo com que a membrana da célula hospedeira se enrole firmemente em torno da bactéria por meio de um mecanismo de zíper.

A bactéria é subsequentemente internalizada dentro de uma vesícula ligada à membrana. Dentro da vesícula, a bactéria produz monômeros de toxina α-hemolisina que se reúnem para formar um complexo de poros na membrana vesicular.

A bactéria escapa através do complexo de poros para o citoplasma da célula hospedeira, onde se replica para formar comunidades bacterianas intracelulares, ou IBCs. Os IBCs são estruturas densas, semelhantes a biofilmes, dentro das células hospedeiras, protegidas do ataque direto de células imunes presentes no espaço extracelular.

À medida que as bactérias uropatogênicas amadurecem dentro dos IBCs, elas eventualmente saem das células hospedeiras para infectar as células vizinhas, causando infecções do trato urinário.

Para inocular camundongos machos, coloque duas pinças de polegar cranial e caudalmente à genitália externa do camundongo. Retraia o prepúcio para expor totalmente a glande do pênis. Então, uma vez que o pênis esteja posicionado externamente, solte a pinça do polegar. Reposicione a pinça para estabilizar o pênis saliente perpendicular ao animal, segurando o órgão suavemente, mas esticado. Em seguida, através da pequena abertura na ponta do meato uretral, introduza cuidadosamente o cateter e guie-o suavemente para dentro do pênis usando uma pinça para manter suavemente a tensão.

Assim que o cubo do cateter encontrar a ponta do pênis, muito lentamente, dispense 50 microlitros do inóculo, mantendo a posição do pênis. Observe a qualidade da instilação de acordo com um índice de qualidade de instilação predeterminado, como o mostrado aqui. Retraia o cateter lentamente ao longo de 5 segundos para evitar vazamento do inóculo. Coloque o mouse em sua gaiola em decúbito dorsal. O animal deve começar a se recuperar 30 a 45 minutos após a administração do anestésico.