Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:43 min. • July 8th, 2025
Para quantificar a infiltração de células imunes no tecido uropatogênico da bexiga de camundongos infectados com E. coli, coloque o tecido picado em um tampão de digestão contendo colagenase e desoxirribonuclease.
Incube com agitação regular para romper o tecido.
A colagenase digere a matriz extracelular do tecido, liberando células. A desoxirribonuclease degrada o DNA livre interferente.
Após a incubação, adicione tampão com um agente quelante e soro fetal bovino para inativar as enzimas digestivas.
Passe a mistura digerida por uma peneira para remover os restos de tecido e tecido conjuntivo, obtendo uma suspensão unicelular.
Centrifugue e ressuspenda as células em um tampão contendo anticorpos bloqueadores de Fc. Esses anticorpos se ligam aos receptores Fc das células imunes para evitar a ligação inespecífica de anticorpos.
Adicione anticorpos anti-CD45 marcados com fluoróforo, que se ligam à proteína CD45 transmembrana nas células imunológicas.
Centrifugue e passe as células ressuspensas por um filtro de células para remover os agregados celulares.
Usando um citômetro de fluxo, meça os sinais de fluorescência dos anticorpos conjugados com fluoróforo nas células imunes para quant
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