JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:33 min • July 8th, 2025
Pegue uma cultura organoide intestinal humana. Os organoides consistem em células epiteliais voltadas para o lúmen central, imitando a arquitetura in vivo.
Pegue um microinjetor contendo esporozoítos em forma de meia-lua - a forma infecciosa - de Cryptosporidium parvum, um parasita.
Injete esporozoítos no lúmen organoide.
As lectinas do parasita se ligam a carboidratos específicos nas células epiteliais, facilitando sua entrada em um vacúolo parasitóforo.
O parasita internalizado se transforma em um trofozoíto - o estágio de alimentação - que adquire nutrientes e sofre reprodução assexuada para formar o meront tipo I, contendo merozoítos - a forma invasiva.
Os merozoítos liberados infectam as células epiteliais vizinhas e desenvolvem merontes do tipo II contendo merozoítos.
Os merozoítos entram nas células vizinhas e se diferenciam em microgamont ou macrogamont - estágios reprodutivos masculino e feminino.
O microgamont sofre divisão para formar microgametas, que são liberados fora do vacúolo.
Um microgameta fertiliza o macrogamont, produzindo um zigoto.
O zigoto sofre divisão, formando um oocisto contendo esporozoíto. Após a liberação, os esporozoítos repetem o ciclo de infecção.
Colha os organoides para avaliar o progresso da infecção.
Para microinjetar os parasitas no lado apical de um organoide 3D, primeiro use um extrator de micropipeta para preparar capilares de injeção de vidro. Use uma pinça para cortar a ponta do capilar em um diâmetro de 9 a 12 micrômetros, para permitir um fluxo fácil de esporozoítos, ou oocistos se você optar por injetar oocistos diretamente, e use pontas de microcarregadeira para preencher cada capilar com uma suspensão rápida de oocisto ou esporozoíto marcado com corante verde.
Em seguida, carregue o primeiro capilar cheio de esporozoíto em um microinjetor e use um microscópio invertido com uma ampliação de 5x e uma pressão constante para microinjetar 100 a 200 nanolitros da suspensão em cada organoide.