Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:37 min. • July 8th, 2025
Durante a infecção, os macrófagos alveolares liberam armadilhas extracelulares de macrófagos ou METs para eliminar patógenos.
Os METs consistem em fibras de cromatina complexadas com peptidil arginina deiminases, PADs, metaloproteinases de matriz e histonas citrulinadas.
Para visualizar METs em macrófagos do fluido de lavagem broncoalveolar, primeiro centrifugue o fluido.
Coloque as células ressuspensas em lamínulas dentro de poços de placas de vários poços.
Os macrófagos se ligam às lamínulas, enquanto outras células permanecem suspensas e são descartadas.
Fixe os macrófagos, preservando a estrutura celular. Permeabilize-os para acessar os alvos celulares.
Adicione proteínas bloqueadoras, impedindo a ligação de anticorpos não específicos.
Suplemento com um coquetel de anticorpos primários que se liga a histonas citrulinadas, PADs e metaloproteinases da matriz, respectivamente.
Adicione diferentes anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários ligados à proteína MET alvo.
Monte as células com meio de montagem contendo DAPI. DAPI, um corante fluorescente, mancha as fibras da cromatina.
Usando um microscópio confocal, visualize os METs caracteriz
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