Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:26 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de cultura contendo uma folha de arroz com pequenas feridas, expondo a epiderme subjacente.
Aplique uma solução umedecededora contendo Tween-20, criando um ambiente propício para o crescimento de fungos.
Coloque um tampão micelial de Magnaporthe grisea, consistindo de conidióforos com conídios - esporos fúngicos reprodutivos, sobre o local ferido.
Incube a folha em uma câmara úmida sob condições de fotoperíodo para promover o crescimento de fungos.
Durante a incubação, os conidióforos liberam esporos que aderem à epiderme exposta, desenvolvendo tubos germinativos.
O tubo germinativo se diferencia em um apressório em forma de cúpula, que gera alta pressão de turgor, formando uma hifa afiada - ou pino de penetração.
O pino de penetração secreta enzimas que degradam a parede celular, facilitando sua entrada na célula epidérmica e a diferenciação em hifas invasivas para aquisição de nutrientes.
Essas hifas crescem e se espalham dentro das células epidérmicas por meio de plasmodesmos - conectando canais entre as células e estabelecendo a infecção.
O fungo secreta toxinas, causando necrose celular e formação de lesões próximas ao local ferido nas folhas, indicando infecção fúngica.
Usando uma agulha anatômica, raspe três feridas de 2 a 3 centímetros de comprimento nas nervuras principais das folhas de arroz destacadas. Coloque as folhas raspadas em palitos de dente e borrife-os com solução Tween-20. Em seguida, corte um tampão micelial de 1/2 por 1/2 centímetro das placas OTA contendo cada cepa de M griseus. Coloque os tampões nas folhas feridas e incube-os em uma câmara úmida a 25 graus Celsius por 3 a 8 dias.
Após o período de incubação, examine e avalie as lesões de acordo com o sistema de pontuação fornecido pelo International Rice Research Institute. Por fim, fotografe as folhas doentes para avaliar a infecciosidade das cepas testadas.