Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:56 min. • July 8th, 2025
Pegue uma cultura de células de câncer de fígado humano, geneticamente modificada para expressar o polipeptídeo co-transportador de taurocolato de sódio ou NTCP - um receptor transmembrana.
Adicione o vírus da hepatite B recombinante ou HBV. O vírus compreende um envelope externo contendo proteínas de superfície e um nucleocapsídeo interno envolvendo o genoma. A inserção de um gene repórter de luciferase inibe a capacidade reprodutiva do vírus.
A proteína do envelope viral se liga ao receptor NTCP da célula hospedeira.
O NTCP interage com o receptor do fator de crescimento epidérmico, EGFR, e oligomeriza, induzindo a endocitose do vírus mediada por EGFR.
O envelope viral se funde com a membrana do endossomo para liberar o nucleocapsídeo, que se desmonta no complexo de poros nucleares.
O genoma viral entra no núcleo e se converte em DNA circular covalentemente fechado ou cccDNA - um modelo estável - que codifica proteínas virais, incluindo a luciferase.
Em intervalos predefinidos, colha as células e lise para liberar luciferase intracelular.
Introduza um substrato repórter. A luciferase oxida o substrato, produzindo um sinal.
Um aumento pós-infecção na atividade da luciferase indica
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos