Instilação Intrabrônquica de Streptococcus pneumoniae em Modelos de Roedores Imunocompetentes

Obtenha um dispositivo de intubação estéril que consiste em uma cânula de metal com tubo de polietileno conectado a uma agulha de metal.

Conecte uma seringa contendo Streptococcus pneumoniae à agulha e encha o tubo.

Em seguida, posicione um rato imunocompetente anestesiado em decúbito dorsal.

Insira a extremidade livre da cânula de metal na boca do rato. Avance-o para a traqueia em direção ao brônquio esquerdo e desça pelo pulmão esquerdo até uma profundidade apropriada.

Avance o tubo até o final da cânula e instile a suspensão bacteriana no lobo pulmonar esquerdo.

A cápsula bacteriana e as enzimas associadas à superfície evitam o aprisionamento bacteriano no muco. Além disso, o Streptococcus pneumoniae se liga aos receptores de superfície nas células epiteliais brônquicas, facilitando a endocitose e a liberação para a superfície basolateral.

As bactérias secretam toxinas que danificam as células epiteliais e as barreiras, desencadeando uma resposta imune.

No entanto, o Streptococcus pneumoniae desenvolveu estratégias para evitar a resposta imune do hospedeiro e estabelecer infecção pulmonar.

Coloque um tapete descartável limpo na superfície de trabalho, próximo ao banho-maria.

Para preparar a superfície de trabalho e o dispositivo de intubação, primeiro esterilize a cânula de metal e o tubo de polietileno de acordo com o protocolo de texto e, em seguida, transfira-o em seu tubo de armazenamento de vidro para a superfície de trabalho. Em seguida, remova a tampa do tubo de armazenamento e deslize a extremidade da alça da cânula até a extremidade aberta do tubo. Usando uma pinça estéril, remova um pedaço de tubo de polietileno do béquer e insira-o no interior da cânula de metal estéril, certificando-se de que ela se mova livremente. Coloque uma marca guia em um local predeterminado com caneta indelével.

Em seguida, encaixe uma agulha descartável estéril de calibre 25 na extremidade livre do tubo de polietileno, deslizando a agulha vários milímetros para dentro do tubo. Em seguida, use solução salina estéril para encher uma seringa descartável de 1 mililitro nova. Conecte a seringa à agulha encaixada no tubo de polietileno e lave todo o volume de solução salina através do tubo.

Descarte a seringa usada no recipiente para objetos cortantes. Em seguida, encha uma nova seringa descartável estéril de 1 mililitro com o inóculo à base de ágar do banho-maria. Recoloque a agulha e o tubo de calibre 25 e lave o ágar através do tubo pressionando o êmbolo apenas até que o tubo esteja completamente cheio de ágar.

Após anestesiar o rato de acordo com o protocolo de texto, colocar o animal em decúbito dorsal sobre o tapete descartável, com a cabeça voltada para a direita e a cauda voltada para a esquerda. Em seguida, insira a extremidade livre da cânula de metal na boca do animal. Gire a cânula de modo que a extremidade livre fique inclinada para cima e avance-a suavemente para dentro da traqueia, contornando cuidadosamente as estruturas laríngeas com um leve movimento de torção.

Confirme a inserção na traqueia em oposição ao esôfago deslizando suavemente a cânula levemente para frente e para trás várias vezes, enquanto usa o dedo indicador esquerdo para palpar os anéis traqueais.

Para garantir a intubação na traqueia e não no esôfago, mova a cânula ligeiramente para frente e para trás e sinta as cristas. Se a cânula deslizar suavemente pela garganta e os sulcos não puderem ser sentidos, remova o dispositivo e tente novamente.

Quando a cânula atingir a bifurcação onde a traqueia se divide nos brônquios esquerdo e direito, faça um leve movimento de torção em direção ao lado esquerdo do animal para garantir que a cânula seja inserida no brônquio esquerdo.

Um erro comum é não colocar o inóculo fundo o suficiente no pulmão, o que pode bloquear as vias aéreas e inibir a respiração. Quando uma cânula é girada para o ângulo adequado, ela deve deslizar facilmente para o brônquio esquerdo e avançar suavemente até a profundidade apropriada.

Avance a cânula de metal até que a extremidade esteja a meio caminho de 3/4 do pulmão esquerdo, usando a marca guia colocada anteriormente para confirmar que a profundidade apropriada foi atingida. Com a cânula de metal no lugar, avance o tubo de polietileno vários milímetros usando a marca guia previamente colocada no tubo para garantir que ele avance apenas o suficiente para sair da extremidade da cânula de metal e não perfurar o pulmão.

Com ambas as cânulas no lugar, use a seringa anexada para instilar 100 microlitros de suspensão de ágar profundamente no lobo grande do pulmão esquerdo. Retire vários milímetros da tubulação e remova cuidadosamente o dispositivo de intubação intacto. Coloque-o de volta no tubo de armazenamento de vidro e mova o animal para uma gaiola nova para se recuperar.