Canulação do Ducto Linfático Mesentérico em Modelo de Rato para Colheita de Fluido Linfático

Comece com um rato intervencionado cirurgicamente com o abdômen exposto.

Localize o ducto linfático mesentérico superior, perpendicular ao rim direito e posicionado na frente e paralelo à artéria mesentérica.

Passe uma pinça reta pelo leito de gordura perirrenal.

Puxe uma cânula linfática através do leito de gordura perirrenal, posicionando uma extremidade adjacente ao ducto linfático e permitindo que a outra extremidade se projete para fora do corpo do animal.

Em seguida, crie uma pequena incisão no ducto linfático.

Encha a cânula com uma solução anticoagulante e insira-a no ducto linfático.

Dentro do ducto, o fluido linfático contém várias biomoléculas, incluindo fatores de coagulação que desencadeiam uma cascata de eventos que levam à formação de coágulos.

No entanto, o anticoagulante se liga aos fatores de coagulação, inibindo sua atividade.

Isso permite que o fluido linfático não coagulado flua livremente através da cânula.

Aplique um adesivo veterinário sobre o orifício de entrada para prender a cânula no lugar.

No dia anterior à cirurgia, corte as cânulas nos comprimentos apropriados e use uma lâmina cirúrgica estéril para fazer um chanfro na ponta de cada pedaço de tubo. Em seguida, para preparar a cânula intraduodenal, enrole a cânula de volta sobre si mesma e, em seguida, aqueça a cânula para criar um ponto de ancoragem no tubo.

No dia da cirurgia, raspe o pelo do lado direito do abdômen e pescoço e regiões da clavícula esquerda de um rato adulto anestesiado e, em seguida, limpe as regiões cirúrgicas assepticamente com três soro sucessivos de iodopovidona e esfoliantes com etanol a 70%.

Para canular o ducto linfático mesentérico, coloque o animal com o lado direito voltado para cima e use uma lâmina de bisturi estéril para abrir a camada superior da parede muscular abdominal com uma incisão reta de quatro centímetros que se estende do apêndice xifóide até o flanco direito, aproximadamente dois centímetros abaixo da margem costal.

Retraia o intestino delgado sob a parede abdominal esquerda e use dois a três pedaços de gaze estéril saturada com solução salina normal para mantê-la no lugar. Em seguida, faça a ponte entre o rato e uma seringa plástica de 10 mililitros colocada horizontalmente sob as costas do animal ao nível do rim direito para auxiliar na visualização do ducto linfático mesentérico.

Localize o ducto linfático mesentérico superior, que tem aproximadamente 0,5 a 1 milímetro de diâmetro, perpendicular ao rim direito e imediatamente rostral e paralelo à artéria mesentérica pulsante vermelha escura. Observe que em ratos sem jejum, como mostrado aqui, o ducto linfático mesentérico superior é branco, opaco e mais fácil de visualizar do que em ratos em jejum.

Em seguida, passe um par de pinças retas pelo leito de gordura perirrenal na margem inferior do rim direito paralela ao ducto linfático mesentérico superior e pelas camadas de tecido conjuntivo, imediatamente abaixo da veia cava. Em seguida, usando a ponta da pinça, puxe a cânula linfática através do leito adiposo perirrenal com uma extremidade imediatamente adjacente ao ducto linfático mesentérico e a outra exteriorizada do animal ao nível do rim direito.

Em seguida, usando um microscópio cirúrgico e uma pinça de joalheiro, isole o ducto linfático mesentérico através das camadas sobrepostas de tecido conjuntivo e adiposo por dissecção romba, começando na extremidade inferior e tomando cuidado para não danificar o ducto linfático. Quando o ducto estiver isolado, use a ponta da pinça de ponta fina para fazer um pequeno orifício no ducto linfático. Depois de garantir que a cânula linfática esteja completamente preenchida com solução anticoagulante e sem espaços de ar, use um pequeno par de pinças para inserir a cânula linfática aproximadamente dois a quatro milímetros dentro do ducto linfático mesentérico através da punção.

Se a canulação for bem-sucedida, um fluxo gradual de linfa intestinal será observado a partir da extremidade coletora livre da cânula. Quando isso ocorrer, coloque uma pequena gota de cola de cianoacrilato sobre o orifício de entrada no ducto linfático para prender a cânula, tomando cuidado para não ocluir o vaso com excesso de cola.