JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 3:03 min • August 20th, 2025
Pegue um rato previamente imunizado com uma emulsão adjuvante de antígeno contendo autoantígenos derivados da glândula lacrimal e antígenos estranhos.
Reinjete a emulsão e injete intraperitonealmente a toxina da coqueluche, garantindo a ativação máxima das células T.
As células ativadas se diferenciam em células T de memória efetoras circulantes, TEMs e células T de memória residentes no tecido, TRMs. Uma porcentagem de TRMs reside nos tecidos da superfície ocular.
Após um intervalo definido, injete os antígenos na subconjuntiva forniceal e nas glândulas lacrimais, induzindo inflamação localizada.
As células apresentadoras de antígenos subconjuntivais, APCs, apresentam antígenos para os TRMs, desencadeando a liberação de citocinas.
As citocinas induzem as células epiteliais conjuntivais a liberar quimiocinas, que recrutam TEMs.
As APCs reativam os TEMs infiltrados, desencadeando a liberação de citocinas pró-inflamatórias.
As citocinas causam a morte das células caliciformes conjuntivais produtoras de mucina, diminuindo os níveis de mucina e causando instabilidade do filme lacrimal.
As citocinas induzem a morte celular da glândula lacrimal - reduzindo a produção de lágrimas - e estimulam as células epiteliais da córnea a produzir metaloproteinases da matriz, danificando a córnea.
Avaliar o rato quanto às características clínicas que indicam uma indução bem-sucedida do olho seco.
No dia zero, distribua 200 microlitros da emulsão que contém 1 miligrama de extrato de glândula lacrimal e 200 microgramas de ovalbumina, e complete o adjuvante de Freund em seringas Luer-lock de 1 mililitro e equipe as seringas com agulhas de calibre 27
.Sem usar anestesia, injete subcutaneamente a emulsão na base das caudas dos ratos. Então, no dia 14, de maneira semelhante, injete 200 microlitros do mesmo antígeno e adjuvante de Freund incompleto. No mesmo dia, injetar intraperitonealmente 300 nanogramas de toxina pertussis em 100 microlitros de PBS.
No dia 48, pese a quantidade necessária de ovalbumina e dissolva-a em PBS e, em seguida, combine a ovalbumina com o extrato de glândula lacrimal descongelado preparado anteriormente neste vídeo, fazendo uma solução de antígeno contendo 1 miligrama por mililitro de ovalbumina e 1 miligrama por mililitro de extrato de glândula lacrimal.
Depois de anestesiar os ratos, injete 5 microlitros de antígeno na subconjuntiva fornicial do olho e, em seguida, injete 20 microlitros de antígeno na glândula lacrimal.