Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:29 min. • July 8th, 2025
Comece adicionando quimioatraentes, como uma quimiocina, em uma placa multipoços.
Coloque uma câmara permeável ao poço de um tamanho de poro apropriado. Adicione a suspensão de células natural killer, ou NK, à câmara superior e incube.
Algumas moléculas de quimiocinas se difundem através da membrana e se ligam aos receptores das células NK. Isso desencadeia vias de sinalização que promovem alterações no citoesqueleto, resultando em movimento celular direcional em direção à maior concentração de quimioatraente na câmara inferior.
Após a incubação, transfira um volume fixo de células migradas da câmara inferior para uma classificação de células ativada por fluorescência ou tubo FACS. Adicione um número predeterminado de contas de contagem fluorescentes e execute a contagem de células baseada em FACS.
Usando a fórmula a seguir, determine o número absoluto de células NK migradas na amostra.
O gráfico de pontos fornece o número de contas de contagem e células separadas como regiões distintas, com base em suas propriedades de fluorescência e dispersão.
Para medir a migração de células NK em resposta a estímulos quimiotáticos, colete células NK humanas de uma cultura confluente de 70% a 8
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