Análise da Eferocitose de Timócitos Apoptóticos por Macrófagos Peritoneais

A eferocitose é o processo pelo qual as células fagocíticas eliminam as células apoptóticas.

Para analisar a eferocitose, obtenha timócitos de camundongo suscetíveis à apoptose. Incubar com corante CFSE permeável a células.

As esterases intracelulares clivam a CFSE em corante fluorescente impermeável às células, corando os timócitos. Adicione soro inativado por calor para evitar manchas excessivas.

Coloque os timócitos corados em uma placa de cultura. Adicione a estaurosporina, um inibidor da proteína quinase, que interrompe a cascata crítica de sinalização celular, induzindo a apoptose. Além disso, os resíduos de fosfatidilserina se translocam para o folheto externo da membrana celular, funcionando como "sinais de coma-me".

Adicione concentrações crescentes de timócitos apoptóticos a poços de placas de vários poços contendo macrófagos peritoneais de camundongos ativados, que expressam tirosina quinases de receptores específicos.

Essas quinases se ligam à fosfatidilserina exposta nos timócitos apoptóticos, facilitando sua internalização pelos macrófagos.

Pós-incubação, remova os timócitos apoptóticos flutuantes. Adicione anticorpos anti-CD11b marcados com fluoróforo, que se ligam à