Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:35 min. • July 8th, 2025
Pegue cepas virulentas e menos virulentas de Staphylococcus aureus.
Adicione soro para opsonizar as bactérias.
Transfira concentrações bacterianas crescentes para poços de placa de vários poços resfriados contendo neutrófilos. Baixas temperaturas impedem a ativação de neutrófilos.
Centrífuga para facilitar a fagocitose sincronizada.
Os receptores de neutrófilos se ligam às opsoninas, desencadeando a internalização bacteriana em fagossomos.
Em bactérias virulentas, o ambiente fagossomal desencadeia a expressão de toxinas citolíticas.
Essas toxinas formam poros, rompendo os fagossomos e comprometendo a integridade da membrana dos neutrófilos.
No entanto, as bactérias menos virulentas exibem expressão reduzida de toxinas citolíticas.
Após a incubação, separar os neutrófilos e transferi-los para tubos de citómetro de fluxo contendo corante fluorescente de iodeto de propídio (PI).
O corante entra nos neutrófilos com membranas comprometidas e mancha o DNA.
Usando um citômetro de fluxo, analise os neutrófilos para a coloração PI.
Um aumento dependente da concentração na proporção de neutrófilos PI-positivos após a fagocitose da cepa virulenta, em comparação com a cepa menos virulenta, ind
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