Visualização de bactérias anaeróbicas internalizadas dentro das células endoteliais do hospedeiro

Comece com uma suspensão de Porphyromonas gingivalis em crescimento ativo, bactérias patogênicas anaeróbicas.

Adicione BCECF-AM, um corante não fluorescente e permeável às células.

As esterases citoplasmáticas ativas hidrolisam o corante em uma forma fluorescente e impermeável às células, corando as bactérias.

centrifuga. Ressuspenda as bactérias em meio anaeróbico.

Adicione as bactérias marcadas a poços de placas de vários poços contendo lamínulas com células endoteliais humanas aderidas.

Incubar em câmara anaeróbica.

As fímbrias bacterianas se ligam aos receptores da superfície celular endotelial, iniciando cascatas de sinalização intracelular.

Isso leva ao rearranjo da actina e à internalização bacteriana dentro dos fagossomos.

Pós-incubação, lave as lamínulas com tampão para remover bactérias não internalizadas.

Fixe as células com paraformaldeído para preservar as estruturas celulares. Permeabilize as células com um detergente não iônico para acessar alvos intracelulares.

Adicione a faloidina marcada com fluorescência, que se liga aos filamentos de actina.

Coloque a lamínula sobre um meio de montagem contendo DAPI, que mancha o DNA.

Observe as Porphyromonas gingivalis fluoresc