Candida albicans Formação de biofilme em um modelo de camundongo in vivo

Pegue um cateter revestido de soro em um tubo de microcentrífuga.

Adicione Candida albicans, um patógeno fúngico comum produtor de biofilme.

Incubar para permitir interações entre as adesinas superficiais nas células fúngicas e as proteínas séricas no cateter, permitindo a aderência fúngica.

Lave o cateter com um tampão para remover as células frouxamente aderidas.

Em seguida, prepare um camundongo imunocomprometido anestesiado para a cirurgia.

Faça uma pequena incisão na pele e crie um túnel subcutâneo.

Insira uma peça de cateter, previamente infectada com fungos, no túnel.

Suturar a incisão.

As células fúngicas se dividem, formando microcolônias no cateter. Essas microcolônias secretam uma substância polimérica extracelular, ou matriz EPS, promovendo a coesão celular e a adesão à superfície.

O EPS, um material rico em biomoléculas, fornece integridade estrutural ao biofilme e protege os micróbios das defesas naturais do hospedeiro.

Com o tempo, o biofilme fúngico desenvolve uma estrutura tridimensional complexa com canais e vazios cheios de água, permitindo a troca de nutrientes, a remoção de resíduos e a comunicação célula a célula.

Vinte e quatro horas antes do procedimento cirúrgico, abra a embalagem contendo os cateteres de triplo lúmen dentro de uma cabine de segurança biológica. Use uma pinça estéril para remover todas as partes desnecessárias e um bisturi estéril para cortar a parte presa ao cateter. Em seguida, coloque uma régua sob a embalagem plástica e corte o cateter de poliuretano em pedaços de um centímetro de comprimento. Em seguida, encha cada cateter com aproximadamente 1,8 mililitros de soro bovino 100% fetal e incube os pedaços a 37 graus Celsius durante a noite.

Na manhã seguinte, transfira cada peça de cateter revestida com soro para tubos de microcentrífuga individuais de 1,5 mililitro e raspe C. albicans de uma placa YPD em 1 mililitro de PBS em um tubo de microcentrífuga separado em uma diluição de 1 a 100. Após a contagem, dilua a suspensão celular até uma concentração final de 5 vezes 10 elevado ao quarto de células por mililitro e adicione 1 mililitro de células a cada uma das peças do cateter revestido com soro.

Deixe as células aderirem aos cateteres por 90 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, segurando os tubos na posição vertical com uma pinça estéril, lave suavemente cada peça através do lúmen duas vezes com 1 mililitro de PBS.

Para colocar os cateteres, comece raspando a parte inferior das costas de um camundongo anestesiado de 8 semanas, posicionado em uma almofada de aquecimento. Em seguida, desinfete a pele e faça uma pequena incisão de 0,5 a 1 centímetro em cada lado do animal. Em seguida, disseque o subcutâneo com uma tesoura para criar dois túneis subcutâneos com cerca de 1,5 centímetros de comprimento e 1 centímetro de largura.

Insira três peças de cateter em cada túnel, certificando-se de que as peças fiquem próximas umas das outras em um arranjo horizontal sem sobreposição. Feche as incisões com suturas e, em seguida, limpe as feridas muito suavemente com um desinfetante. Em seguida, aplique um anestésico local diretamente nas incisões e administre um agente reversor de anestesia, monitorando os animais até que estejam totalmente recuperados.