Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:18 min. • July 8th, 2025
Comece com subpopulações de macrófagos M1 e M2 aderentes, distinguidas por seus marcadores de superfície específicos. Essas células estão infectadas com Mycobacterium tuberculosis marcado com fluorescência.
Adicione o buffer FACS aos poços de cultura.
O EDTA no tampão permite o desprendimento celular dos poços de cultura.
Transfira a suspensão celular para tubos de microcentrífuga.
Centrifugue os tubos. Descarte o sobrenadante. Ressuspenda as células em um coquetel de anticorpos antimacrófagos conjugado com fluorocromo e corante de viabilidade, Zombie-UV.
O corante de fluorescência Zombie-UV entra nas células mortas através de membranas danificadas e se liga a proteínas citoplasmáticas, permitindo uma diferenciação clara de células viáveis não coradas.
Além disso, os anticorpos antimacrófagos conjugados com fluorescência se ligam a antígenos-alvo nos macrófagos, permitindo a detecção diferencial de subpopulações.
Lave as células para remover anticorpos não ligados. Centrifuga. Remova o sobrenadante.
Ressuspenda as células em um tampão fixador para reticular proteínas, preservando a morfologia celular e inativando micobactérias para manuseio seguro durante a análise.
Finalmente, cen
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