Coloração de células bacterianas e preparação para estudos imunológicos

Comece com um tubo contendo uma cultura bacteriana na fase exponencial, garantindo bactérias uniformes e de crescimento ativo para resultados consistentes.

Centrifugue para coletar as células; aspire o sobrenadante contendo detritos e ressuspenda as células.

Introduza um corante fluorescente vermelho permeável às células. As moléculas de corante penetram na membrana celular bacteriana e atingem o nucleóide, ligando-se ao DNA e transmitindo fluorescência vermelha às bactérias.

Centrifugue para pellet as bactérias coradas e aspire o sobrenadante contendo corante não ligado.

Ressuspenda as bactérias em um meio de crescimento para manter a viabilidade celular.

Com um fotómetro, medir a absorvância da suspensão bacteriana diluída a 600 nanómetros.

Compare o valor de absorbância com uma curva padrão para determinar a concentração bacteriana.

Transfira o volume desejado da suspensão bacteriana corada para um novo tubo contendo um meio de crescimento. Isso é para atingir a concentração bacteriana desejada para a infecção da célula hospedeira que representa a multiplicidade de infecção, ou MOI.

As bactérias coradas com o MOI desejado estão prontas para estudos imunológicos.

Primeiro, colha