JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 3:12 min • July 8th, 2025
Pegue um camundongo anestesiado pré-imunizado com Mycobacterium tuberculosis morto pelo calor, ou Mtb, que induz uma resposta imune e gera células T específicas para Mtb.
Administre colírios para dilatação da pupila para aumentar a penetração da luz para melhorar a imagem dos olhos. Aplique um gel para evitar a desidratação da córnea.
Enrole o mouse em gaze para manter o calor do corpo e coloque-o na tomografia de coerência óptica ou no sistema OCT.
Visualize os olhos para obter imagens transversais da câmara anterior, incluindo a córnea e o cristalino, e da câmara posterior, incluindo a retina.
Examine para garantir a ausência de inflamação.
Injete Mtb morto pelo calor na cavidade vítrea. O imunógeno se espalha pelo olho e desencadeia uma resposta imune, induzindo a infiltração de células T específicas de Mtb pré-formadas e outras células imunológicas, resultando em inflamação denominada uveíte.
A OCT da câmara anterior revela células imunes infiltradas e edema da córnea, enquanto a OCT da câmara posterior indica inflamação vítrea.
Pontue as imagens de OCT com base na gravidade da inflamação para quantificar a progressão da uveíte.
Após anestesiar o camundongo, dilate a pupila com uma gota de fenilefrina a 2,5%, evitando que o excesso de gotículas entre no nariz ou na boca. Após dois a três minutos, retire o excesso de líquido e cubra o olho com gel de hipromelose a 0,3%. Em seguida, enrole o mouse em uma camada de gaze cirúrgica para manter o calor do corpo, coloque o mouse no do animal e posicione a cabeça com a barra de mordida.
Para adquirir a tomografia de coerência óptica ou imagens OCT, ligue o sistema de imagem OCT e abra o software de imagem. Para imagens de câmara posterior, aproxime a OCT da superfície do olho, tomando cuidado para não colocar a superfície da lente em contato com o olho.
Assim que o olho estiver posicionado corretamente, pare o Fast Scan, selecione o protocolo Volume Scan e ative o escaneamento com a opção Aim. Para imagens do segmento posterior, ajuste até que o nervo óptico esteja centralizado na imagem de alinhamento horizontal do B-Scan e a retina esteja alinhada com o eixo de alinhamento vertical. Para imagens do segmento anterior, ajuste a posição para centralizar o ápice da córnea na imagem de alinhamento do B-Scan horizontal e na imagem de alinhamento do B-Scan vertical. Por fim, clique em Instantâneo para capturar a imagem de varredura de volume. Em seguida, clique em Salvar.