Um procedimento de recorte de cauda de camundongo para coleta de sangue periférico e isolamento de plasma
JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:51 min • July 8th, 2025
Posicione um rato dentro de uma câmara desinfetada para garantir o acesso à sua cauda.
Prenda a câmara para minimizar o movimento do mouse.
Esterilize a cauda e anestesiá-la.
Usando uma tesoura cirúrgica afiada, corte uma pequena porção da ponta da cauda do rato, que contém uma rede de vasos sanguíneos.
Este procedimento de corte de cauda permite a coleta de um pequeno volume de sangue periférico.
Colete o sangue em um tubo capilar heparinizado usando a ação capilar do tubo. O tubo heparinizado ajuda a prevenir a coagulação do sangue.
Usando uma seringa de bulbo, transfira o sangue para um tubo revestido com EDTA.
Inverta o tubo para uma mistura adequada do sangue com EDTA, um anticoagulante. O EDTA se liga aos íons de cálcio no sangue, impedindo a coagulação.
Centrifugue o tubo para separar o plasma das células sanguíneas.
Recolha e transfira a camada superior contendo plasma para um novo tubo.
Armazene o tubo em temperaturas mais baixas para manter a integridade dos componentes do plasma.
Para coletar uma amostra de sangue periférico, primeiro posicione suavemente o camundongo em um limitador de pequenos animais desinfetado e prenda o tubo para minimizar os movimentos do animal.
Em seguida, esfregue a cauda com álcool isopropílico fresco, seguido da aplicação de creme anestésico tópico.
Usando uma tesoura cirúrgica muito afiada, corte cerca de 0,5 a 1 milímetro da ponta da cauda e colete aproximadamente 80 microlitros de sangue periférico em tubos capilares heparinizados.
Use uma seringa de bulbo para transferir as amostras de sangue para o tubo microtainer de potássio-EDTA marcado e inverta o tubo 20 vezes para evitar a coagulação.
Depois de centrifugar os tubos de coleta de sangue de acordo com as instruções do fabricante, colete cuidadosamente a camada de plasma e armazene as alíquotas a menos 20 graus Celsius e alíquotas o plasma para armazenamento de menos 20 graus Celsius.
Visão Geral
Este artigo detalha um método para coletar amostras de sangue periférico de camundongos por meio de um procedimento de corte da cauda. O processo garante desconforto mínimo ao animal, ao mesmo tempo que permite a coleta de sangue para análises posteriores.
Principais Componentes do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Fisiologia animal
- Técnicas de coleta de amostras de sangue
Antecedentes
- A coleta de sangue periférico é fundamental para diversas análises biológicas.
- Minimizar o estresse animal durante os procedimentos é essencial para uma pesquisa ética.
- O manejo e armazenamento adequados das amostras de sangue são vitais para manter a integridade da amostra.
- O EDTA é comumente utilizado como anticoagulante na coleta de sangue.
Objetivo do Estudo
- Descrever um método padronizado para coletar sangue periférico de camundongos.
- Garantir que o procedimento seja seguro e eficaz tanto para o animal quanto para o pesquisador.
- Fornecer diretrizes para o manejo e armazenamento adequados das amostras de sangue.
Métodos Utilizados
- Posicionar o mouse em uma câmara desinfetada.
- Usar tesoura cirúrgica para cortar a cauda e coletar sangue.
- Utilizar tubos capilares heparinizados para a coleta de sangue.
- Centrifugar as amostras para separar o plasma das células sanguíneas.
Resultados Principais
- Coleta bem-sucedida de aproximadamente 80 microlitros de sangue.
- Prevenção eficaz da coagulação utilizando EDTA.
- As amostras de plasma foram armazenadas a -20 graus Celsius para manter a integridade.
- O procedimento demonstrou estresse mínimo para o animal.
Conclusões
- O método de corte da cauda é uma técnica confiável para coleta de sangue em camundongos.
- A esterilização e manipulação adequadas são fundamentais para a qualidade da amostra.
- Este método pode ser adaptado para diversas necessidades experimentais na pesquisa em neurociência.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A coleta de sangue periférico de modelos murinos permite a análise farmacocinética e farmacodinâmica em estudos pré-clínicos. O isolamento confiável de plasma apoia a descoberta de biomarcadores e ensaios de engajamento de alvos. Este método fornece uma abordagem padronizada e de baixo estresse para amostragem seriada em fluxos de trabalho de descoberta de fármacos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a medição de biomarcadores circulantes para validar a modulação do alvo in vivo.
- Valor Operacional: Fornece amostras reprodutíveis de plasma para ELISA, CL-EM ou ensaios imunológicos multiplex.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaios
- Valor Científico: Apoia o desenvolvimento de ensaios utilizando matrizes plasmáticas murinas autênticas.
- Valor Operacional: Garante qualidade consistente das amostras para validação de triagem em alto rendimento.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Facilita o monitoramento longitudinal da exposição e resposta ao fármaco.
- Valor Operacional: Permite a comparabilidade entre estudos por meio da coleta e armazenamento padronizados.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este método insere-se no continuum de descoberta que vai da administração in vivo à análise bioanalítica, apoiando a otimização de compostos promissores e a avaliação pré-clínica de segurança.
- Descoberta Biológica: Permite a correlação entre o engajamento do alvo e os resultados fenotípicos.
- Triagem: Fornece plasma para triagem comparativa e perfis de seletividade.
- Análises: Fornece amostras estáveis em relação ao analito para bioanálise quantitativa.
- Pesquisa Translacional: Apoia a qualificação de biomarcadores em modelos relevantes para a doença.
- Reutilização Institucional: Estabelece um POP reutilizável para coleta de sangue murino em diferentes projetos.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Reduz a variabilidade nos dados farmacocinéticos por meio de uma técnica padronizada.
- Valor Operacional: Minimiza o uso de animais por meio de microamostragem eficiente (80 µL).
- Valor Estratégico: Acelera decisões de prosseguimento ou interrupção com dados confiáveis de exposição.
- Impacto no Portfólio: Melhora a previsão da translação clínica por meio de amostras plasmáticas de qualidade.
Considerações sobre a Implementação
- Treinamento em técnica asséptica e manipulação de animais.
- Acesso a centrífuga, tubos microcoletor e armazenamento sob refrigeração.
- Padronização entre operadores e instalações.
- Adaptação a diferentes linhagens ou idades de camundongos.
- Limitação: O volume da amostra pode restringir painéis de ensaios multiplex.
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Última atualização: 22 agosto 2026