Visualização de bactérias em seções de biópsia de bexiga via hibridização in situ fluorescente

Comece com uma lâmina de vidro carregando uma seção de tecido de biópsia da bexiga urinária infectada desparafinizada e reidratada contendo bactérias uropatogênicas.

Introduza sondas universais marcadas com fluorescência - um oligonucleotídeo de fita simples complementar específico para a região conservada do RNA ribossômico 16s bacteriano, ou 16s-rRNA.

Incube a lâmina no escuro a uma temperatura elevada para uma hibridização ideal.

Durante a incubação, as sondas hibridizam exclusivamente com a região conservada no 16s-rRNA bacteriano, conferindo fluorescência verde às bactérias.

Após a hibridização, lave com um tampão pré-aquecido para remover as sondas não ligadas.

Manchar a seção de tecido com corante Hoechst e marcadores de proteína celular marcados com fluoróforo.

As moléculas de Hoechst se ligam ao DNA, colorindo os núcleos de azul, enquanto os marcadores marcados com fluoróforo interagem com componentes celulares específicos, como filamentos de mucina e actina, conferindo fluorescência vermelha na seção de biópsia.

Lave a lâmina e adicione mídia de montagem à seção de tecido.

Sob um microscópio confocal, a fluorescência verde dentro da seção de biópsia da bexiga que transpor