Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:37 min. • July 8th, 2025
Pegue tubos citômetros contendo uma mistura de coloração composta por anticorpos monoclonais marcados com fluorescência suspensos em um tampão de estimulação.
Adicione concentrações decrescentes do alérgeno de teste em vários tubos. Adicione anticorpos anti-IgE a um tubo para servir como controle positivo mediado por IgE e adicione tampão a outro tubo para o controle negativo.
Pipete o sangue periférico humano para os tubos. Incubar.
Se o indivíduo for sensibilizado ao alérgeno de teste, essa exposição faz com que o alérgeno se ligue aos anticorpos IgE específicos do alérgeno ligados aos receptores Fc na superfície basófila.
Os alérgenos reticulam os receptores Fc ligados à IgE, causando ativação de basófilos.
Os basófilos sofrem degranulação, liberando grânulos intracelulares contendo mediadores inflamatórios, com a regulação positiva das moléculas CD63 e CD203c.
Os anticorpos monoclonais marcados com fluorescência ligam-se a CD63, CD203c e CCR3 em basófilos, respectivamente.
Abaixe a temperatura para interromper a degranulação do basófilo.
Adicione tampão para lisar eritrócitos e fixar as células.
Usando um citômetro de fluxo, identifique os basófilos da população de linfócitos.
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