Rastreamento de leucócitos baseado em fotoconversão em peixe-zebra transgênico infectado por bactérias

Comece com um prato contendo larvas de peixe-zebra transgênicas, anestesiadas e embebidas em agarose, expressando a proteína fluorescente fotoconversível em seus leucócitos - células imunes fagocíticas.

A vesícula ótica esquerda, pré-injetada com bactérias marcadas com corante fluorescente vermelho, é posicionada contra o fundo do prato.

Dentro da vesícula ótica, as bactérias pré-injetadas causam uma infecção local, desencadeando a migração de células imunes e a liberação de quimiocinas, causando infiltração de leucócitos na vesícula ótica.

Sob um microscópio de fluorescência, observe o recrutamento inicial de leucócitos verdes e a fagocitose de bactérias vermelhas pelos leucócitos no local da infecção.

Ilumine a vesícula ótica com um comprimento de onda de 405 nanômetros, transformando irreversivelmente a proteína fluorescente fotoconversível de verde para vermelho e transmitindo fluorescência vermelha aos leucócitos - permitindo sua visualização distinta e rastreamento preciso.

Agora, examine as larvas em dois comprimentos de onda diferentes em várias profundidades, permitindo a visualização de leucócitos de fluorescência vermelhos fotoconvertidos e verdes restantes.

Os

leucócito