Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:43 min. • July 8th, 2025
Pegue um tubo contendo sangue humano recém-coletado e adicione um tampão de lise.
O detergente no tampão permeia a membrana celular, lisando as células e liberando ácidos nucléicos intracelulares, ou NAs, e nucleases.
Os agentes caotrópicos no tampão desnaturam as nucleases, evitando a degradação do NA.
Adicione partículas magnéticas de vidro ou MGPs - partículas magnéticas revestidas de sílica - e misture bem.
O baixo pH do tampão protona a sílica, produzindo uma carga positiva na superfície dos MGPs.
NAs carregados negativamente se ligam eletrostaticamente à superfície carregada, formando um complexo NA-MGP.
Sob um campo magnético, os complexos NA-MGP se acumulam na lateral do tubo.
Descarte o sobrenadante contendo detritos celulares e proteínas.
Execute várias etapas de lavagem ressuspendendo os complexos NA-MGP em um tampão de lavagem, aplicando um campo magnético para coletar os complexos e descartando o sobrenadante com os contaminantes restantes.
Ressuspenda os complexos em um tampão de eluição. O pH alto interrompe a interação NA-MGP, liberando os NAs. Os NAs eluídos estão prontos para ensaios a jusante.
Para purificar os ácidos nucléicos do sangue coletado, misture novamen
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