Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 7:53 min. • July 8th, 2025
Prepare uma lâmina de câmara com uma bicamada lipídica suportada, ou SLB, composta de fosfolipídios e fosfolipídios biotinilados.
Adicione proteínas bloqueadoras para evitar interações inespecíficas.
Introduza estreptavidina, que se liga aos fosfolipídios biotinilados.
Adicione anticorpos anti-CD16 marcados com fluorescência biotinilada, que se ligam à estreptavidina imobilizada.
Pipeta D-biotina para evitar a ligação não específica da estreptavidina às células.
Introduza células natural killer, ou NK. Os receptores CD16 nessas células se ligam especificamente a anticorpos anti-CD16 ligados à SLB, formando uma sinapse imunológica.
Essa ligação desencadeia o rearranjo da actina e a polarização dos microtúbulos, eventualmente formando microaglomerados no centro da sinapse contendo anticorpos anti-CD16 ligados à SLB e receptores CD16.
Os grânulos líticos contendo perforina polarizam e penetram através dos filamentos de actina na sinapse.
Corrija as células. Permeabilize as membranas e a SLB.
Adicione anticorpos de faloidina e anti-perforina marcados com fluorescência, que se ligam a filamentos de actina e perforina, respectivamente.
Usando um microscópio de fluorescência de super-reso
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