Um ensaio para medir a citotoxicidade induzida quimicamente em fatias de pulmão humanas cortadas com precisão

Pegue uma placa de vários poços contendo fatias de pulmão humanas cortadas com precisão, que mantêm a microarquitetura pulmonar nativa.

Remova a mídia. Adicione concentrações crescentes de agente de teste aos poços e incuba.

Dependendo de seu potencial citotóxico, o agente de teste rompe as membranas celulares, induzindo a morte celular e reduzindo as células viáveis dentro das fatias.

Pós-incubação, remova a mídia. Mergulhe as fatias em meios contendo sal de tetrazólio solúvel em água, ou WST-1, e um reagente de acoplamento de elétrons.

incubar. Em células metabolicamente ativas, o sistema de transporte de elétrons da membrana plasmática transfere elétrons do NADH intracelular para o reagente de acoplamento de elétrons extracelular, reduzindo o corante impermeável à célula WST-1 para formazan estável, amarelo-escuro e solúvel em água.

Após a incubação, agite a placa para distribuir uniformemente o formazan e transfira-o para uma placa de vários poços.

Usando um leitor de microplacas, meça a absorbância do formazan, indicativo da viabilidade do tecido.

Uma diminuição na absorbância do formazan, dependente da concentração do agente de teste, indica viabilidade reduzida do corte do p