Avaliação da citotoxicidade e integridade da membrana em fatias pulmonares por meio do ensaio de lactato desidrogenase

Comece com fatias de pulmão humanas cortadas com precisão, PCLS, tratadas com agentes citotóxicos como moléculas de surfactante em uma placa multipoços.

O surfactante se insere na bicamada lipídica da célula, fazendo com que as caudas hidrofóbicas do surfactante interajam com o núcleo hidrofóbico da bicamada lipídica.

Consequentemente, o arranjo ordenado das moléculas lipídicas é perturbado, levando à formação de uma micela.

Isso compromete a integridade da membrana, causando o vazamento de conteúdo intracelular, incluindo lactato desidrogenase ou LDH, um indicador comum de danos à membrana celular.

Colete o sobrenadante contendo o LDH liberado.

Adicione o coquetel de reação do ensaio LDH contendo substrato de lactato, NAD +, diaforase e sal de tetrazólio e incube.

A LDH oxida o lactato em piruvato, com redução simultânea da coenzima NAD+ a NADH.

A diaforase utiliza o NADH para reduzir o sal de tetrazólio em formazan - um produto colorido.

A citotoxicidade induzida por surfactante pode ser medida a partir da atividade de LDH indicada pela produção de formazan.

Depois de incubar o PCLS com ou sem agentes de teste, transfira 50 microlitros de sobrenadante e duplicatas para uma nova p