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$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Pegue uma solução de gadolínio paramagnético que responda a campos magnéticos externos.
Introduza amostras de sangue Rhesus ou fator Rh positivo e negativo para fator Rh não marcado com fluorescência.
Adicione grânulos de polímero de baixa densidade revestidos com anticorpos anti-RhD e grânulos de alta densidade não revestidos.
Os anticorpos anti-RhD ligam-se aos antígenos RhD nas hemácias Rh positivas, formando complexos de grânulos-hemácias.
Agora, carregue a amostra em um tubo capilar e sele-o. Coloque o tubo entre os ímãs no dispositivo de levitação magnética.
No campo magnético gerado por ímãs voltados para pólos semelhantes, a solução paramagnética exerce forças magnéticas e de empuxo nos componentes da amostra, fazendo com que eles levitem em alturas proporcionais às suas densidades.
Contas de baixa e alta densidade levitam na parte superior e inferior do capilar, respectivamente, estabelecendo referências de altura de densidade.
As células sanguíneas, sendo diamagnéticas, são repelidas por um forte campo magnético próximo aos ímãs e levitam em uma posição intermediária.
Os complexos bead-RBC levitam entre beads de baixa densidade e RBCs, com células fluorescentes nesta camada confirmando a presença de hemácias Rh-positivas.
Para começar, use o dispositivo de lanceta de um clique para picar o dedo do doador de sangue positivo para fator Rhesus e colete 10 microlitros de sangue em 1 mililitro de DPBS. Adicione 1 microlitro de corante fluorescente em suspensão de 1 mililitro das células positivas para o fator Rhesus para corar fluorescentemente a membrana plasmática e incube a 37 graus Celsius por 15 minutos. Pulverize as células girando a 5.600 vezes g por 15 segundos e lave o pellet três vezes, usando 1 mililitro de DPBS. Ressuspenda o pellet em 1 mililitro de HBSS com cálcio e magnésio. Use o dispositivo de punção de um clique para picar o dedo do doador de sangue negativo para fator Rhesus e colete dois microlitros de sangue.
Para preparar o tubo experimental contendo apenas grânulos, adicione 174 microlitros de HBSS com cálcio e magnésio, 1 microlitro de grânulos de controle IgG, 1 microlitro de grânulos pesados, com densidade de 1,2 grama por mililitro, e 24 microlitros de gadolínio 500 milimolar.
Para preparar o tubo de controle experimental contendo IgG, adicione 172 microlitros de HBSS com cálcio e magnésio, 1 microlitro de grânulos de controle de IgG, 1 microlitro de grânulos pesados, 1 microlitro de sangue negativo para fator Rhesus, 1 microlitro de suspensão de sangue positiva para fator rhesus corado e 24 microlitros de gadolínio 500 milimolar.
Para preparar o tubo experimental de amostra, adicione 172 microlitros de HBSS com cálcio e magnésio, 1 microlitro de esferas revestidas com anti-RhD, 1 microlitro de esferas pesadas, 1 microlitro de sangue negativo para fator rhesus, 1 microlitro de suspensão de sangue positiva para fator rhesus corado e 24 microlitros de gadolínio 500 milimolar. Configure o dispositivo de levitação magnética e carregue 50 microlitros da amostra em um tubo capilar até que o tubo esteja cheio.
Sele as extremidades do tubo capilar com um selante capilar, garantindo que não haja bolhas. Coloque o tubo capilar no suporte capilar entre os ímãs superior e inferior. Ajuste a platina e foque para uma visualização ideal. Aguarde aproximadamente 5 a 20 minutos para que as células e grânulos se assentem em sua posição de equilíbrio magnético.