Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:40 min. • July 8th, 2025
Comece adicionando um agente farmacológico imunomodulador às células dendríticas imaturas, ou DCs.
As DCs expressam o complexo principal de histocompatibilidade, ou molécula MHC classe II e moléculas co-estimulatórias, cruciais para promover a proliferação de células T durante as respostas imunes.
O agente imunomodulador se envolve com o DC e desencadeia a regulação negativa da expressão de moléculas MHC classe II e co-estimulatórias, convertendo assim o DC em uma célula dendrítica tolerogênica ou TolDC.
Co-cultura de TolDCs com células T CD4+ virgens.
Adicione um peptídeo antigênico à co-cultura.
Os TolDCs internalizam o peptídeo, posteriormente processando e carregando o antígeno resultante na molécula de MHC.
A molécula de MHC ligada ao antígeno se transloca para a membrana celular.
As células T CD4+ virgens interagem diretamente com o complexo antígeno-MHC em TolDCs.
A interação com a molécula co-estimulatória na DC madura permite a ativação total da célula T virgem.
Sem co-estimulação, a célula T CD4+ virgens permanece dormente e não pode iniciar uma resposta imune contra o antígeno apresentado.
Ressuspenda as células em uma concentração de 2 x 105 células dendríticas por mililitro e trate-as com a concentração experimental apropriada do triterpenóide de interesse por 1 hora a 37 graus Celsius.
Durante o último terço da incubação, ressuspenda as células T a uma concentração de 1 x 107 células por mililitro e 1 CFSE micromolar por 15 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, lave as células com PBS e reajuste o volume para uma concentração final de 2 x 10células 6 T por mililitro.
Co-cultive 100 microlitros das células dendríticas tratadas com 100 microlitros de células T CD4 CD4-positivas marcadas com CFSE em cada poço de uma placa de 96 poços e adicione 100 nanogramas por mililitro de peptídeo OVA 322-329 às células, medindo a intensidade CFSE das células T por citometria de fluxo após 2 a 3 dias de incubação.