Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:34 min. • July 8th, 2025
Pegue uma lamínula contendo mastócitos - células imunes com grânulos secretores, ou SGs, contendo mediadores inflamatórios.
Adicione anticorpos IgE junto com um repórter fluorescente sensível ao pH e incuba.
Os anticorpos se ligam aos receptores Fc nos mastócitos. Os repórteres são internalizados por pinocitose e os endossomos resultantes se fundem com os SGs.
Remova a mídia. Adicionar um antigénio contendo vários epítopos de ligação à IgE; Coloque a lâmina sob um microscópio de fluorescência e aplique o comprimento de onda de excitação necessário.
O pH ácido dos SGs extingue a fluorescência do repórter.
O antígeno se liga a complexos receptores de IgE na superfície da célula, reticulando-os.
A agregação do receptor mediada por antígeno faz com que os SGs migrem em direção à membrana plasmática.
As proteínas SNARE no plasma e na membrana SG medeiam a fusão da membrana e a descarga da carga SG, denominada exocitose.
O pH mais alto do meio causa alcalinização do SG, induzindo os repórteres a recuperar a fluorescência.
Os SGs de entrada se fundem com os fundidos por membrana. A alcalinização do segundo SG medeia a recuperação de fluorescência, confirmando a exocitose do composto.
Adic
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos