Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:54 min. • July 8th, 2025
Pegue esplenócitos depletados de glóbulos vermelhos em um tampão contendo um corante fluorescente sensível ao cálcio permeável por células, Indo-1 AM.
As esterases intracelulares clivam o Indo-1 AM em Indo-1 impermeável à membrana, que se liga aos íons de cálcio, alterando o sinal de fluorescência do Indo-1 de azul para violeta.
Introduzir anticorpos específicos do antígeno conjugado com fluoróforo que se ligam especificamente aos respectivos antígenos nas células.
Usando citometria de fluxo, identifique células B marcadas com fluoróforo e meça sua taxa de fluorescência violeta para azul Indo-1.
Agora, trate as células com lipossomas antigênicos compreendendo fragmentos IgM Fab conjugados a bicamadas de lipossomas.
Os receptores de células B se ligam aos antígenos acoplados a lipossomas, ativando as tirosina quinases citoplasmáticas associadas e desencadeando a ativação da fosfolipase-C gama-2.
A fosfolipase-C ativada cliva o fosfolipídio da membrana, fosfatidilinositol 4,5-bifosfato, gerando segundos mensageiros, incluindo inositol 1,4,5-trifosfato, ou IP3.
O IP3 se liga aos canais de cálcio dependentes de IP3 no retículo endoplasmático, liberando íons de cálcio no citoplasma.
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