Uma técnica de cromatografia de exclusão de tamanho para purificar vesículas extracelulares micobacterianas

Pegue uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho embalada com uma matriz inerte de partículas de resina polissacarídica. As partículas porosas têm um tamanho de poro definido.

Lave a coluna com um tampão de equilíbrio para uma purificação ideal.

Adicione um filtrado de cultura concentrado processado a partir de uma cultura de Mycobacterium tuberculosis - uma bactéria patogênica. O filtrado contém vesículas extracelulares, ou EVs, e outras proteínas solúveis secretadas pelas bactérias.

Os EVs são estruturas esféricas, pequenas e de tamanho heterogêneo. Eles contêm macromoléculas e fatores de virulência encerrados em uma bicamada lipídica.

A amostra entra na matriz sob gravidade. Adicione o buffer para permitir o movimento da amostra através da coluna.

Os EVs não podem entrar na resina devido ao pequeno tamanho dos poros e, em vez disso, movem-se pelo espaço interpartículas, percorrendo um caminho mais curto e eluindo primeiro.

As proteínas, tendo um tamanho menor, entram nos poros, percorrem um caminho mais longo através da resina e eluem no final.

Colete as frações contendo EVs para análise a jusante.

Permita que a cromatografia de exclusão de tamanho, ou coluna SEC, se equ