Uma técnica zWEDGI para visualizar larvas de peixe-zebra infectadas por patógenos fúngicos

Comece com larvas de peixe-zebra transgênicas expressando células imunes marcadas com fluorescência marcadas com marcadores fluorescentes exclusivos para rastreamento preciso.

As larvas são pré-injetadas com proteína fluorescente vermelha que expressa esporos de Aspergillus, em seu rombencéfalo.

Dentro do rombencéfalo, os esporos do fungo imitam a inflamação local e atraem células imunológicas, incluindo macrófagos, que fagocitam esporos para sua depuração.

Enquanto alguns esporos persistem e germinam em hifas, liberando moléculas derivadas de patógenos e atraindo neutrófilos para o local da infecção.

Transfira uma larva anestesiada para a câmara de carregamento contendo meio do dispositivo de ferimento e aprisionamento do peixe-zebra para crescimento e imagem, ou zWEDGI, dispositivo interconectado à câmara de ferimento por meio de um canal de restrição.

Prenda a larva dentro do canal de restrição em uma orientação dorsal-lateral para imagens do rombencéfalo.

Nos estágios iniciais, a fluorescência vermelha representa os esporos do fungo, enquanto a fluorescência verde confirma o recrutamento de macrófagos para o local da infecção.

Com o tempo, a disseminação da fluorescência vermel