Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:54 min. • July 8th, 2025
Comece revestindo uma lamínula com poli-L-lisina biotinilada para criar uma superfície rica em biotina.
Em seguida, introduza a estreptavidina - uma proteína que se liga à biotina, formando uma ponte molecular para interações subsequentes.
Em seguida, adicione peptídeos fotocaged biotinilados ligados aos principais complexos de histocompatibilidade - pMHCs junto com moléculas de adesão.
Os ligantes pMHC biotinilados e as moléculas de adesão interagem com regiões específicas da estreptavidina, permitindo sua imobilização.
Em seguida, lave a lamínula com solução salina tamponada repetidamente e introduza células T.
A presença de uma fotogaiola, um grupo químico sensível à luz ligado a um resíduo específico no peptídeo, obstrui a ligação espontânea do receptor de células T ao peptídeo.
Para ativação controlada de células T, exponha os peptídeos fotoenjaulados à luz ultravioleta.
A luz UV quebra a ligação química entre o complexo fotogaiola-peptídeo, expondo a forma nativa do peptídeo.
Os receptores de células T identificam e se ligam aos peptídeos expostos, enquanto as integrinas se ligam às moléculas de adesão, desencadeando a ativação das células T.
Comece adicionando poli-L-lisina
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