Um método de localização de imunofluorescência in vivo para estudar a biodistribuição de anticorpos

Pegue um modelo murino de câncer de mama. Os tumores da glândula mamária compreendem células cancerígenas, fibroblastos associados ao câncer, adipócitos, células imunes e vasculatura tumoral.

Injete por via intravenosa anticorpos específicos do tumor conjugados com fluoróforo.

Ao atingir a vasculatura tumoral, os anticorpos se ligam a proteínas transmembranares específicas do tumor no endotélio do vaso e nas células cancerígenas próximas.

Isole cirurgicamente a glândula mamária e mergulhe-a em um meio de congelamento.

Obtenha seções criogênicas em uma lâmina e enxágue com um tampão para remover o meio de congelamento.

Fixe as seções para preservar a arquitetura do tecido. Aplique um detergente para melhorar a imunocoloração e uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.

Introduza um anticorpo primário específico para moléculas de adesão no endotélio do vaso sanguíneo e um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo que se liga ao anticorpo primário, marcando a vasculatura.

Adicione um meio de montagem no slide e coloque uma lamínula.

Sob um microscópio confocal, avalie a biodistribuição de anticorpos específicos do tumor dentro e ao redor da vascul