Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:28 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo uma suspensão de leucócitos humanos. Adicione esporos de fungos patogênicos marcados com FITC.
Durante a incubação, os esporos incham e quebram sua rígida camada de proteína hidrofóbica, expondo os polissacarídeos da parede celular reconhecidos por receptores de reconhecimento de padrões específicos nas células fagocíticas.
Essa ligação desencadeia vias de sinalização intracelular, levando ao rearranjo da actina e à internalização dos esporos nos fagossomos.
Dependendo do estado de ativação dos fagócitos, alguns esporos permanecem aderidos às células sem internalização.
Após a incubação, colha as células e transfira-as para um novo tubo.
centrifuga. Ressuspenda as células em um tampão e transfira-as para uma placa de fundo em V de vários poços.
Introduza anticorpos anti-FITC marcados com fluoróforo que se ligam às moléculas FITC expostas nos esporos aderentes, contracolorindo-os.
centrifuga. Ressuspenda as células em um tampão e transfira-as para tubos de citômetro de fluxo.
Realize citometria de fluxo para diferenciar entre esporos internalizados e aderentes à célula.
Os fagócitos contendo esporos internalizados exibem sinais FITC, enquanto
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