Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:34 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo células de osteossarcoma aderentes em lamínulas.
Essas células cancerígenas ósseas são pré-tratadas com um produto químico indutor de estresse, resultando na formação de grânulos de estresse.
Os grânulos de estresse são organelas sem membrana citoplasmática que compreendem mRNAs não traduzíveis, pequenas subunidades ribossômicas, proteínas de ligação a RNA ou RBPs, fatores relacionados à tradução e proteínas de sinalização.
Descarte a mídia e lave as células com tampão. Fixe as células para preservar a morfologia celular.
Permeabilize as células para acessar alvos intracelulares. Adicione proteínas bloqueadoras para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Introduzir anticorpos primários que se ligam a RBPs específicos e fatores relacionados à tradução dentro dos grânulos de estresse.
Incubar com diferentes anticorpos secundários marcados com fluoróforo e corante Hoechst.
Os anticorpos secundários se ligam aos anticorpos primários ligados às proteínas associadas ao grânulo de estresse, enquanto as moléculas de Hoechst coram o DNA.
Monte as lamínulas contendo células usando a mídia de montagem.
Usando um microscópio de fluorescência, o
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