JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 2:59 min • July 8th, 2025
Pegue Mycobacterium bovis BCG, uma bactéria atenuada causadora de tuberculose, e injete-a por via intradérmica em um camundongo.
Uma resposta inflamatória contra a bactéria forma um granuloma composto por bactérias, macrófagos epitelióides, macrófagos convencionais e linfócitos.
Realize ressonância magnética ou ressonância magnética. O campo magnético alinha prótons orientados aleatoriamente no tecido em sua direção.
Aplique um pulso de radiofrequência perpendicular ao campo magnético. Os prótons absorvem energia do pulso e se inclinam para longe do campo.
Quando o pulso para, os prótons emitem a energia absorvida, denominada decaimento de indução livre ou FID, e se realinham com o campo.
Meça o sinal FID para obter uma imagem. A duração da cárie é específica do tecido e as áreas com uma cárie mais longa parecem mais claras.
Pegue nanossondas superparamagnéticas conjugadas a anticorpos policlonais específicos para Mycobacterium e injete por via intravenosa.
Os anticorpos se ligam a vários epítopos na bactéria, marcando o granuloma.
As nanossondas encurtam o decaimento dos prótons vizinhos para fazer o granuloma parecer mais escuro, confirmando a infecção micobacteriana.
Para inocular animais experimentais com M. bovis BCG, primeiro reconstitua a vacina liofilizada, ou estoque bacteriano, em meio de Sauton, e dilua a solução estoque reconstituída com solução salina. Em seguida, carregue 100 microlitros da solução em uma seringa de 1 mililitro por animal e injete todo o volume de bactérias, por via intradérmica, na pele escapular dorsal esquerda ou direita de cada camundongo.
Para imagens de ressonância magnética in vivo de animais injetados com nanossonda viva, adquira imagens de eco de rotação rápida ponderadas em T2 de cada animal experimental anestesiado, antes de injetar dois nanomolares de sondas de anticorpos SPIO-Tb, suspensos em 200 microlitros de solução salina na veia da cauda de cada camundongo. Em seguida, faça uma imagem dos animais novamente, imediatamente após a injeção e a cada cinco minutos pelos próximos 30 minutos.
Ao final da sessão de imagem, analise quantitativamente as imagens de ressonância magnética, usando a intensidade do sinal como medida das regiões de interesse definidas em locais comparáveis de um centro de granuloma de M. tuberculosis e o músculo dorsal adjacente a uma área granulomatosa. Em seguida, use a fórmula para calcular os aprimoramentos relativos do sinal, usando a medição da intensidade do sinal antes e, de zero a três horas, após a injeção dos agentes de contraste.