Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:59 min. • July 8th, 2025
Comece com tubos contendo sangue total humano, incluindo glóbulos vermelhos, ou hemácias, e glóbulos brancos, ou leucócitos, como monócitos e granulócitos, e outras células sanguíneas.
Introduza dihidroetídio - um indicador de superóxido e bactérias não marcadas em um tubo. Trate o outro tubo com bactérias marcadas com fluoróforo verde.
Granulócitos e monócitos interagem com as moléculas associadas a patógenos da bactéria, envolvendo-as em fagossomos.
Isso ativa a enzima de membrana fagossomal NADPH oxidase, reduzindo o oxigênio molecular a um ânion superóxido.
O ânion superóxido produz ainda peróxido de hidrogênio - uma espécie de oxigênio reativo, ou ROS, resultando em uma explosão oxidativa.
Dentro do fagossomo, as ROS oxidam o diidroetídio para formar 2-hidroxietídio, que cora o DNA bacteriano, conferindo uma fluorescência vermelha.
Introduza um supressor, para extinguir a fluorescência extracelular.
Adicione uma solução de lisagem, eliminando a interferência potencial de hemácias, e corrija os leucócitos.
Na citometria de fluxo, as células com fluorescência verde confirmam a atividade fagocítica dos granulócitos e monócitos, enquanto as células com fluorescência vermelha em ou
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